Антигены вич

Главная » ВИЧ » Антигены вич

Антиген к ВИЧ: что собой представляет, какую роль играет в диагностике?

Диагностика вируса иммунодефицита производится различными способами. Однако наибольшую популярность в последнее время набирают сверхчувствительные тест-систиемы. С их помощью удается выявить данный недуг на самых ранних этапах. Для этого используется антиген ВИЧ, присутствие которого в организме гарантированно указывает на неприятный и опасный диагноз. Для его обнаружение применяется несколько различных исследований.

Почему реакция ВИЧ 1, 2 антиген-антитела является наиболее достоверным показателем наличия вируса иммунодефицита?

анализ на вич аг ат

Проверка на вирус иммунодефицита в государственных медицинских учреждениях является бесплатной. Но производится она в два этапа в том случае, если это необходимо. Изначально АГ к ВИЧ не проверяются. Первый анализ на предмет наличия или отсутствие данного заболевания направлен на выявление антител. Это ИФА-тестирование. Иммуноферментный анализ позволяет выявить людей, которые гарантировано не больны вирусом иммунодефицита (в том случае, если проверка проводилась по всем правилам).

А также условно инфицированных. Почему условно? Дело в том, что антитела к ВИЧ 1,2, в отличие от АГ к данному вирусу, выделяются в организме и по другим причинам. О чем конкретно идет речь. В первую очередь такое возможно при заболеваниях иммунной системы. При проблемах с этой жизненно важной системой организм в качестве защиты вырабатывает антитела, которые определяются посредством иммуноферментного анализа, как и те, что появляются при данном опасном недуге. Если результат ИФА оказывается положительными, больного направляют на дополнительное исследование, которое основано на выявлении реакции АГ – АТ 1,2 типа. В поликлиниках чаще всего используется иммунный блоттинг. Это самый распространенный тип анализа по обнаружению вируса иммунодефицита. С его помощью антиген и антитела к ВИЧ 1 и 2 не только выявляются, но и проверяются на прочность реакции.

Что такое антиген р24 к ВИЧ?

Прежде чем говорить о том, какими методами может быть выявлен hiv ag антиген ВИЧ, следует пояснить, что он собой представляет. Ученым давно удалось выяснить, что АГ, который маркируется в бланках анализов и в лабораториях маркировкой р24, является капсидом ретровируса. Говоря простыми словами, он является белком вируса иммунодефицита. Определение антигена ВИЧ невозможно без выявления антител первого и второго типа. Ведь АГ являются прочно связанными с антителами. Они образуются в организме в качестве иммунного ответа на появление АТ, которые, в свою очередь, являются своего рода «интервентами», направленными на разрушение иммунной системы и продуцирование опасного биологического материала.

АТ и АГ к ВИЧ 1 и 2 типа выявляются в реакции друг с другом. Первые выполняют в организме человека роль чужеродных молекул. Вторые служат своеобразными проявителями белков или полисахаридов. В случае с вирусом иммунодефицита АГ вызывают иммунный ответ. Соответственно, в медицине и науке, связанной с изучением данного заболевания, они классифицируются как иммуногены.

Р24 антиген ВИЧ 1 и 2 типа выявляются только посредством комплексного исследования биологического материала. Чаще всего для анализа используют венозную кровь. В некоторых случаях для этого подходит сперма или секреторная жидкость, выделяемая женскими половыми органами. Комбинированный анализ на ВИЧ антиген производится тремя известными способами. О каких конкретно исследованиях идет речь? Это иммунный блоттинг, комбо тест (hiv combo ВИЧ) и иммунохемилюминесцентный анализ. О каждом из них следует поговорить отдельно.

Иммунный блоттинг: антитела и антигены к ВИЧ 1 и 2

Как уже говорилось выше, иммунный блоттинг является одним из самых распространенных тестов, выявляющих антиген к ВИЧ. Каким образом он производится? Изначально у пациента берут кровь из вены. Обследование производится натощак. За тридцать – сорок минут до этого пациенту не рекомендуют курить. Суть исследования заключается в том, что если у человека в организме имеется вирус иммунодефицита 1 или 2 типа, реакция антиген – антитела является стойкой и неразрывной. Биологический материал испытуемого сначала расщепляют в специальном реактиве, затем помещают на стрипс, в качестве которого, как правило, выступает блистер с полистирольными ячейками. В результате добавления специальных реактивов, лаборант сначала выясняет, произойдет ли данная реакция, а затем при помощи неоднократных промывок крови, делает выводы о том, насколько стойкой она является. Это позволяет понять, имеется ли в организме вирус иммунодефицита, что в дальнейшем является самым важным фактором при постановке диагноза.

Анализ на ВИЧ АГ-АТ, производимый посредством иммунного блоттинга, рекомендуется сдавать не ранее, чем через четыре – пять недель после предполагаемого инфицирования. Несмотря на то, что этот тест является системой четвертого поколения, он не относится к сверхчувствительным и имеет погрешность в несколько процентов (от двух до трех).

Сверхчувствительный анализ: hiv duo ВИЧ (комбо) антитела 1, 2 типа

Анализ на ВИЧ (hiv) ag – ab (АГ-АТ) combo в отличие от иммунного блоттинга является сверхчувствительным. Специалисты в области медицины утверждают, что его применение целесообразно уже через две недели после предполагаемого инфицирования. Он направлен на исследование специфических антител, которые являются своеобразным иммунным ответом организма человека на такого интервента, как вирус иммунодефицита, а также АГ р24. Нiv duo ВИЧ антитела 1 и 2 типа также направлен на то, чтобы выявить антитела к данному опасному недугу. С его помощью удается не только обнаружить их в крови, но и определить тип заболевания.

Тест на антиген ВИЧ combo является комбинированным. С его помощью также проверяется реакция антиген-антитело, которая свидетельствует о наличии в организме страшного недуга.

Иммунохемилюминесцентный анализ: hiv 1,2 combo ВИЧ АТ-АГ ИХЛА

Тест ИХЛА на ВИЧ ат-аг также является сверхчувствительным. В основе такого исследования лежит своеобразная реакция АГ-АТ. Специфичность метода составляет порядка девяноста двух процентов, тогда как его достоверность – от девяноста восьми до девяноста девяти. Из этого можно сделать вывод о том, что погрешность у такого анализа есть, но она сравнительно невелика. И в случае необходимости легко перекрывается повторной проверкой. Применяется такой анализ уже через две или три недели после предполагаемого инфицирования.

Этот комбо тест на ВИЧ направлен на исследование венозной крови, в случае с проверкой на предмет наличия в организме вируса иммунодефицита. При выявлении других заболеваний и патологий используется моча или секреторная жидкость, которая выделяется из половых органов. АТ и АГ к вирусу иммунодефицита при ИХЛА также проверяются на реакцию. Для этого используются специальные реагенты и стрипс с ячейками. Проводимое в несколько этапов исследование позволяет быстро и точно установить диагноз или опровергнуть его.

Все вышеописанные способы диагностики вируса иммунодефицита посредством стойкой реакции АТ-АГ являются эффективными. Разнятся они лишь по допустимым срокам исследования. Решать, какой конкретно метод следует использовать, должен врач.

Источник: http://www.zppp.saharniy-diabet.com/vich-spid-1/diagnostika-2/antitela-1/antigen

Тест-системы четвёртого поколения для одновременного выявления антигенов ВИЧ и антител к ВИЧ

У большинства больных антитела к ВИЧ выявляются через 6–12 недель после заражения с использованием тест-систем первых поколений и через 3–4 недели с использованием тест-систем третьего поколения, работающих по принципу сэндвич-ИФА с двумя антигенами. Однако ВИЧ-инфекция выявляется уже спустя 2 недели после заражения путем анализа на антиген p24 и уже через 1 неделю - путем анализа на вирусную РНК. Другими словами, период окна можно сократить до 2 недель и более с помощью комплексного диагностического подхода. Капсидный антиген p24 появляется в крови при бурной репликации вируса в острой лихорадочной фазе ВИЧ-инфекции и в этот период легко обнаруживается с помощью простого и сравнительно дешевого ИФА.

Если стоит задача выявить всех ВИЧ-инфицированных, в том числе лиц с ранними стадиями инфекции, то необходимо использовать весь арсенал анализов: на антитела, на антигены и на РНК. Однако тестирование на вирусную РНК дорого стоит, требует больших трудозатрат и недоступно для большинства лабораторий. И все же те лаборатории, в которых есть оборудование для ИФА, способны выявлять большинство случаев ВИЧ-инфекции при условии тестирования проб как на антитела к ВИЧ, так и на антиген p24.

В конце 1990-х гг. появились тест-системы для параллельного ИФА на антитела к ВИЧ и антиген p24, снявшие необходимость проведения раздельных анализов. Разработано и внедряется новое поколение комбинированных тест-систем для одновременного выявления антител к ВИЧ и антигенов ВИЧ.

Преимущество комбинированных анализов заключается в том, что они занимают меньше времени, требуют меньших трудозатрат и экономически более выгодны, чем раздельные анализы. Комбинированные тест-системы обладают высокой аналитической чувствительностью как за счет применения сэндвич-ИФА с двумя антигенами для выявления антител к ВИЧ, так и за счет одновременного выявления антигена p24.

В настоящее время на рынке имеется 8 комбинированных тест-систем четвертого поколения, прошедших клинические испытания: VIDAS HIV DUO Ultra (bioMérieux; Марси-л’Этуаль, Франция); Enzymun-Test-HIV-Combi (Boehringer; Мангейм, Германия); Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB (Organon Teknika; Бокстел, Нидерланды); AxSYM-HIV Ag/AB (Abbott Laboratories; Эбботт-Парк, Иллинойс, США); Enzygnost HIV Integral (Dade Behring; Марбург, Германия); Genescreen Plus HIV Ag-AB (Bio-Rad), and COBAS Core HIV Combi (Roche Diagnostics; Мангейм, Германия); Elecsys-HIV Combi (Boehringer; Мангейм, Германия). В последней тест-системе применен электрохемилюминесцентный сэндвич-метод с двумя антигенами; анализ занимает 18 минут; специфичность по данным испытаний на госпитализированных больных составляет 99,8%. Эта тест-система позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию на 5 дней раньше, чем самые чувствительные тест-системы на антитела к ВИЧ. Существует еще одна комбинированная тест-система без торговой марки для ИФА на антитела и антиген p24 с чувствительностью всего 99,5% и специфичностью 94,8%.

Комбинированный анализ на антитела и антиген для выявления недавней и длительно существующей ВИЧ-инфекции оправдан не только при тестировании доноров крови, но и во многих клинических ситуациях. Ранний диагноз ВИЧ-инфекции путем выявления антигена p24 позволяет безотлагательно начать лечение, провести консультирование больного и принять меры для снижения риска передачи инфекции. Благодаря способности выявлять антиген p24 тест-системы четвертого поколения позволяют диагностировать ВИЧ-инфекцию на ранних стадиях. Эти тест-системы весьма полезны для диагностики недавней и длительно существующей ВИЧ-инфекции в больничных и независимых клинических лабораториях и диагностических центрах (как бюджетных, так и коммерческих). В подобные учреждения нередко обращаются пациенты, риск ВИЧ-инфекции у которых значительно выше, чем у доноров крови. Для раннего выявления ВИЧ-инфекции у таких пациентов требуются тест-системы с высокой аналитической чувствительностью.

Важно отметить, что высокая аналитическая и эпидемиологическая чувствительность большинства тест-систем четвертого поколения, доказанная в испытаниях на больных из разных популяций, больных с сероконверсией и больных с разными подтипами ВИЧ, делает эти тест-системы незаменимыми для диагноза как недавней, так и длительно существующей ВИЧ-инфекции в самых разных ситуациях. Так, например, в клинических лабораториях бюджетных учреждений здравоохранения тестирование крови на антигены ВИЧ обычно не проводится (это прерогатива станций переливания крови), и поэтому при стандартном тестировании на антитела к ВИЧ случаи недавней инфекции могут быть пропущены. Было показано, что выявление инфекции на ранних стадиях дает основание вовремя начать антиретровирусную терапию, что повышает ее эффективность. Кроме того, появляется возможность своевременно проконсультировать пациента, правильно организовать его ведение и предотвратить передачу ВИЧ-инфекции.

Экспресс-тесты: Это класс тест-систем, дающих результат быстрее, чем через 30 минут. Экспресс-тесты для выявления специфических антител к ВИЧ появились в конце 1980-х гг., а в начале 1990-х гг. приобрели популярность. Благодаря усовершенствованию технологии производства экспресс-тесты стали не менее точными, чем ИФА (при условии, что анализ проводится аккуратно, квалифицированным сотрудником). Однако из-за мнимой простоты экспресс-тестов персонал часто допускает ошибки. Например, при внесении реагентов пипетки не всегда держат вертикально (как указано в инструкции), что нарушает соотношение объемов реагентов. Еще один источник ошибок - стремление многих лаборантов одновременно провести анализ нескольких проб. Из-за этого не выдерживается время этапов анализа.

При правильном выполнении экспресс-тесты на антитела к ВИЧ дают надежные результаты и могут использоваться в самых разных медицинских учреждениях и клинических ситуациях. В частности, их применяют в приемных отделениях, кабинетах врачей, амбулаториях, патологоанатомических отделениях, моргах, пунктах переливания крови, а также везде, где требуется срочное тестирование на ВИЧ (например, после контакта медицинского работника с возможным источником инфекции).

Экспресс-тесты на ВИЧ незаменимы для тестирования рожениц, за которыми не проводилось дородовое наблюдение (т. е. рожениц с невыясненным ВИЧ-статусом). Показано, что антиретровирусная терапия (в частности, зидовудином) эффективно снижает риск вертикальной передачи ВИЧ и что такое лечение в максимально ранние сроки необходимо матери, а затем и новорожденному. Экспресс-тестирование беременной на ВИЧ в предродовом периоде позволяет в случае выявления антител начать лечение до родов.

Источник: https://www.eurolab.ua/aids/2878/2888/35436/

Тест-системы четвёртого поколения для одновременного выявления антигенов ВИЧ и антител к ВИЧ (продолжение...)

Иммуноблотинг: Иммуноблоттинг - самый распространенный подтверждающий тест для выявления антител к ретровирусам; большинство специалистов считают этот метод эталонным при подтверждении ВИЧ-инфекции. Метод основан на электрофоретическом разделении антигенов ВИЧ, полученных из лизата вирусов, выращенных в клеточной культуре. При электрофорезе вирусные белки денатурируются, приобретают отрицательный заряд и разделяются по молекулярной массе. Разделение вирусных антигенов позволяет выявлять специфические антитела к каждому из них в ходе последующего анализа, методологически сходного с ИФА. Смесь очищенных антигенов ВИЧ вносят в несколько лунок на краю пластины полиакриламидного геля, содержащего додецилсульфат натрия, после чего проводят электрофорез. При этом антигены ВИЧ из каждой лунки мигрируют вдоль пластины геля. Скорость миграции определяется зарядом и молекулярной массой антигенов (так, высокомолекулярные антигены проходят меньшее расстояние от точки старта). После завершения электрофореза гель накладывают на нитроцеллюлозную мембрану и переносят на нее разделившиеся антигены (эта процедура называется блоттингом и проводится путем электропереноса). Мембрану разрезают на полоски, на каждой из которых представлен полный набор антигенов ВИЧ. На полоски наносят тестируемую или контрольную сыворотку в разведении 1:50 или 1:100, инкубируют и отмывают. С этого момента методика сходна с любым непрямым иммунным анализом. Полоски инкубируют с мечеными антителами против человеческих иммуноглобулинов. В качестве метки обычно используют фермент (пероксидазу или щелочную фосфатазу), который катализирует превращение бесцветного хромогенного субстрата в окрашенный нерастворимый продукт. В результате на полоске образуются поперечные окрашенные полосы в тех местах, где образовались комплексы антиген-антитело. Положительные сыворотки дают набор полос, характерный для ВИЧ-инфекции. Многие из этих полос были идентифицированы как специфические продукты вирусных генов. Антигены ВИЧ-1 при электрофорезе распределяются следующим образом (начиная от точки старта): gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17, p15. Буквой «p» обозначают белки, буквами «gp» - гликопротеиды. Цифрами обозначают молекулярную массу антигенов (в кДа). При анализе результатов иммуноблоттинга надо помнить, что в исходном лизате содержатся не только антигены ВИЧ, но и белки культивируемых клеток, в которых размножался вирус. Эти белки могут образовывать полосы в разных местах, чаще всего - в зоне между 40 и 60 кДа. Неспецифическое связывание антител из тестируемой пробы с клеточными белками может затруднить оценку результатов.

Интерпретация результатов: В зависимости от того, какие антитела к ВИЧ присутствуют в тестируемой пробе, на нитроцеллюлозных полосках видны разные наборы полос. По характеристике набора полос (их числу и интенсивности окрашивания) и судят о том, присутствуют ли в пробе антитела к ВИЧ. Результаты иммуноблоттинга оценивают по определенным критериям. Согласно этим критериям, проба считается положительной, если присутствуют по крайней мере две из трех полос, соответствующих антигенам p24, gp41 и gp120/160. Проба считается отрицательной только в том случае, когда нет ни одной из полос, соответствующих антигенам ВИЧ. Однако две организации, включая ВОЗ, придерживаются мнения, что пробу можно считать отрицательной, если имеется лишь одна очень слабо окрашенная полоса p17. Результат считается сомнительным, если имеется одна полоса или более, соответствующая антигенам ВИЧ, но критерии положительного результата не выполняются.

К сожалению, сыворотки некоторых людей, не инфицированных ВИЧ, при иммуноблоттинге в той или иной степени реагируют с одним или несколькими антигенами ВИЧ. Такая реакция бывает почти у 15% здоровых людей, не инфицированных ВИЧ; она нередко наблюдается у лиц с отрицательным результатом скринингового тестирования. Таким образом, многие сыворотки, давшие отрицательный результат при скрининговом тестировании методом ИФА, дадут сомнительный результат при иммуноблоттинге. В большинстве случаев при сомнительных результатах слабо окрашиваются полосы, соответствующие белкам полипротеина Gag (главным образом, p17, p24 и/или p55). Встречаются и другие наборы полос, но реже. Любой результат иммуноблоттинга, не удовлетворяющий критериям положительного или отрицательного результата, должен считаться сомнительным.

Источник: https://www.eurolab.ua/aids/2878/2888/35436/?page=3